Langkah pertama pembuatan humulin adalah mensintesis secara kimiawi rantai DNA yang membawa urutan nukleotida spesifik yang mencirikan rantai polipeptida insulin A dan B. Urutan DNA yang diperlukan dapat ditentukan karena komposisi asam amino dari kedua rantai telah dipetakan. Enam puluh tiga nukleotida diperlukan untuk mensintesis rantai A dan sembilan puluh untuk rantai B, ditambah kodon di ujung setiap rantai, yang menandakan penghentian sintesis protein. Sebuah anti-kodon, menggabungkan asam amino, metionin, kemudian ditempatkan di awal setiap rantai, yang memungkinkan penghapusan protein insulin dari asam amino sel bakteri. Gen rantai A dan B sintetik kemudian secara terpisah dimasukkan ke dalam gen untuk enzim bakteri, B-galaktosidase, yang dibawa dalam plasmid vektor. Pada tahap ini, sangat penting untuk memastikan bahwa kodon gen sintetik kompatibel dengan kodon B-galaktosidase. Plasmid rekombinan kemudian dimasukkan ke dalam sel E. coli. Protein yang terbentuk, sebagian terdiri dari B-galaktosidase, bergabung dengan rantai insulin A atau B. Rantai A dan B kemudian diekstraksi dari fragmen B-galaktosidase dan dimurnikan. Kedua rantai dicampur dan dihubungkan kembali dalam reaksi yang membentuk jembatan silang disulfida, menghasilkan humulin murni, insulin manusia sintetis.
Soal: Beberapa langkah yang terlibat dalam produksi humulin diberikan di bawah ini. Pilih urutan yang benar. I. Sintesis gen (DNA) untuk insulin manusia secara artifisial II. Kultur E.coli rekombinan dalam bioreaktor III. Pemurnian humulin IV. Penyisipan gen insulin manusia ke dalam plasmid V. Introduksi plasmid rekombinan ke dalam E.coli VI. Ekstraksi produk gen rekombinan dari E.coli
A» I, IV, V, II, VI, III
B» III, V, II, I, VI, IV
C» II, I, IV, III, V, VI
D» I, III, V, VI, II, IV